檢視植物防疫挑戰如何精準檢驗植物病毒的原始碼

<font size="6">植物防疫挑戰 ――如何精準檢驗植物病毒</font>
<s4e>
pid=194
show=原始設計者;簡介
</s4e>
<div style="float:left;">
<font color="red" size="5">學習病毒檢測候選目標基因選定，以及植物病毒候選目標基因引子設計方法。
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<div style="float: right; border:black 1px solid;">
<font color="blue">實驗材料: </font>
:*葉片 數片
:*1.5 ml 離心管 3/個	
:*廢液杯	1/個
:*離心機 1/個
:*tip 1/個
:*Rank	1/個
:*電子秤	1/個
:*打洞器	1/個
:*微量離心管	1/個
:*Master mix(Taq, buffer, dNTP, dye)	10/µL
:*TE buffer 100/ml
:*Primer F’  4/µL
:*Primer R’  4/µL
:*ddH2O	 1/µL
:*PCR machine	1/台
:*電泳槽	1/台


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==1.現象說明： ==


1.Potato virus 馬鈴薯微嵌紋病毒
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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b4/Potato_virus.png' width='600px' height='200'>
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病毒顆粒為絲狀彎曲 ( Transmission electron micrographs)。PVX 感染茄科植物其病徵表現主要為系統性，感染藜科（Chenopodiaceae）或莧科（Amaranthaceae）後會造成局部性病斑（local lesions），也會感染部分豆科植物（Leguminosae）。
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病徵：
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*潛伏感染，並無明顯症狀
*輕微：斑駁
*嚴重：
**皺葉嵌紋
**植株矮化
**新生葉片小化
**植株頂端、塊莖大量壞疽，植株死亡
<table border="1">
　
</table>
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2.Tobacco mosaic virus  煙草嵌紋病毒
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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/48/Tobacco_mosaic_virus.jpg' width='600px' height='250'>
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人類第一個成功分離出的病毒
以通過濾過器，故又稱「濾過性病毒」，引起的病害稱「病毒病」、「毒素
病」，為介於生物與非生物之間的病原體。
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病徵：
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*葉部呈現不規則之暗綠色與淡綠嵌紋，嵌紋邊緣多為波浪狀

*葉片細胞壞疽

*葉片向下捲曲
**在菸草(Nt)過敏反應(NN vs nn)
<table border="1">
　
</table>
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3.Tomato leaf curl Taiwan virus 台灣番茄捲葉病毒
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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/5b/Tomato_leaf_curl_Taiwan_virus.jpg' width='600px' height='250'>
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人類第一個成功分離出的病毒
以通過濾過器，故又稱「濾過性病毒」，引起的病害稱「病毒病」、「毒素
病」，為介於生物與非生物之間的病原體。
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病徵：
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*花枯萎現象
*植株嚴重矮化
*片明顯朝上捲起、變形
*從葉緣及中肋附近區域明顯黃化現象
*罹病植株結果很少；開花期以前罹染此病毒幾乎無法結果





==2.探究問題：（此為引導，學習者必須要提出合理的假說） ==

*2.1 病毒如何感染植物？
*2.2 植物病變的成因可能有哪些？
*2.3 如何辦別植物病變的原因？

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==3.實作項目 ==
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*3.1.至NCBI BLAST選取目標基因 https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi
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*3.2 下載cDNA   (Download cDNA) 
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*3.3 找起始密碼子ATG 終止密碼子TGA    (Find ATG, TGA)
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*3.4 設計前置引子  (Design primers Forward  (AT:GC 1:1  ;  GC tail; 5’-3’; 20 mer))
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*3.5 設計反置引子  (Design primers Reverse (https://www.bioinformatics.org/sms/rev_comp.html))
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*3.6訂製引子  (Order primers)
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*3.7 備製100、10 及 1 uM 的引子  (Preparation of primer stock 100, 10 and 1 uM)
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練習：
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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/9/9f/TLCTWV_cDNA.jpg' width='1000px' height='450'>