檢視 PCR檢測植物病毒感染的原始碼

<font size="6">PCR檢測植物病毒感染</font>
<s4e>
pid=194
show=原始設計者;簡介
</s4e>
<div style="float:left;">
<font color="red" size="5">觀察植物在特定病毒感染後病徵，並利用PCR技術檢測植物是否有被病毒感染。
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<div style="float: right; border:black 1px solid;">
<font color="blue">實驗材料: </font>
:*葉片 數片
:*1.5 ml 離心管 3/個	
:*廢液杯	1/個
:*離心機 1/個
:*tip 1/個
:*Rank	1/個
:*電子秤	1/個
:*打洞器	1/個
:*微量離心管	1/個
:*Master mix(Taq, buffer, dNTP, dye)	10/µL
:*TE buffer 100/ml
:*Primer F’  4/µL
:*Primer R’  4/µL
:*ddH2O	 1/µL
:*PCR machine	1/台
:*電泳槽	1/台


</div>

==1.現象說明： ==


1.Potato virus 馬鈴薯微嵌紋病毒
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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b4/Potato_virus.png' width='600px' height='200'>
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病毒顆粒為絲狀彎曲 ( Transmission electron micrographs)。PVX 感染茄科植物其病徵表現主要為系統性，感染藜科（Chenopodiaceae）或莧科（Amaranthaceae）後會造成局部性病斑（local lesions），也會感染部分豆科植物（Leguminosae）。
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病徵：
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*潛伏感染，並無明顯症狀
*輕微：斑駁
*嚴重：
**皺葉嵌紋
**植株矮化
**新生葉片小化
**植株頂端、塊莖大量壞疽，植株死亡
<table border="1">
　
</table>
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2.Tobacco mosaic virus  煙草嵌紋病毒
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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/48/Tobacco_mosaic_virus.jpg' width='600px' height='250'>
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人類第一個成功分離出的病毒
以通過濾過器，故又稱「濾過性病毒」，引起的病害稱「病毒病」、「毒素
病」，為介於生物與非生物之間的病原體。
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病徵：
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*葉部呈現不規則之暗綠色與淡綠嵌紋，嵌紋邊緣多為波浪狀

*葉片細胞壞疽

*葉片向下捲曲
**在菸草(Nt)過敏反應(NN vs nn)
<table border="1">
　
</table>
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3.Tomato leaf curl Taiwan virus 台灣番茄捲葉病毒
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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/5b/Tomato_leaf_curl_Taiwan_virus.jpg' width='600px' height='250'>
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人類第一個成功分離出的病毒
以通過濾過器，故又稱「濾過性病毒」，引起的病害稱「病毒病」、「毒素
病」，為介於生物與非生物之間的病原體。
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病徵：
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*花枯萎現象
*植株嚴重矮化
*片明顯朝上捲起、變形
*從葉緣及中肋附近區域明顯黃化現象
*罹病植株結果很少；開花期以前罹染此病毒幾乎無法結果





==2.探究問題：（此為引導，學習者必須要提出合理的假說） ==

*2.1 病毒如何感染植物？
*2.2 植物病變的成因可能有哪些？
*2.3 如何辦別植物病變的原因？

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==3.實作項目 ==
<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/e/e3/Experimental_methods.png' width='700px' height='130'>

1.萃取DNA：
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*1.	利用打洞器裁出 3-5 mm直徑的葉片
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*2.	將 1 片葉片放入1.5 ml離心管中，加入100 μl 溶劑
**註：不要研磨葉片
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*3.	65 ℃加熱5分鐘  98 ℃加熱2分鐘
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*4.	置於冰上2分鐘
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*5.	所得液體即為萃取液
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*6.	進行濃度測定

<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/9/98/Extraction_of_dna.jpg' width='700px' height='150'>
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2.PCR：
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加19 ml混合液於PCR tube後，再加1 ml DNA
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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/c/c1/PCR-Polymerase_Chain_Reaction.jpg' width='1000px' height='400'>

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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/52/Method_Electrophoresis.jpg' width='800px' height='450'>

3.電泳：
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*1.Marker加入2 ml
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*2.控制組與實驗組分別加入5 ml
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*3.設定電壓與時間，95V 跑 35分鐘
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*4.外染
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*5.利用UV光照膠
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<img src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/d9/Electrophoresis_photo.jpg' width='900px' height='450'>




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==4.分析與結論 ==
*4.1 由電泳膠圖可判斷植物是否感染病毒
*4.2 由電泳膠圖可判斷樣品之分子量大小


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==5.教學目標與評量 ==
*5.1 能熟悉DNA萃取的操作方式。
*5.2 熟悉PCR和電泳的操作方式。
*5.3 能從PCR膠圖判斷樣品的種類。






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==6.參考資料： ==
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==7.參考說明： ==
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