"光敏素對種子發芽率影響" 修訂間的差異

於 2020年8月6日 (四) 18:51 的修訂

光敏素對種子發芽率影響

原始設計者：彰師大

探討光敏素 Pr、Pfr對好光性植物種子萌發的關係。

實驗材料:

苜蓿芽種子 20粒
培養盤 4個
厚紙巾 4張
水適量
鋁箔 8張
手電筒 2個
紅色透明玻璃紙 2張
藍色透明玻璃紙 4張
綠色透明玻璃紙 1張
紅色透明玻璃紙 2張

1.現象說明：

1.光敏素（phytochrome）

　植物細胞中含量稀少的藍綠色素，成分為蛋白質，分為鈍化型（proteinred, Pr）和活化型（proteinfar-red, Pfr）兩種型態，分別吸收紅光和遠紅光而互相轉換。植物主要透過光敏素接收外界光的信號來調節本身的生長、發育和開花。過去知道在晚上，Pfr構形的光敏素會慢慢回到Pr構形；這個過程稱為黑暗回復（dark reversion）　　

2.光敏素的作用

2.1光週期性植物的開花誘導

Pfr < Pr 促進短日照；抑制長日照

Pfr > Pr 抑制短日照；促進長日照

2.2 種子的萌發

Pfr 促進感光性種子萌發

Pr 抑制感光性種子萌發

2.3 幼苗的生長

Pfr促進葉綠素、胡蘿蔔素、花青素合成；葉綠體的形成；子葉、葉、莖的生長

2.探究問題：（此為引導，學習者必須要提出合理的假說）

2.1 光線是如何影響種子的發芽？
2.2 好光性植物種子除了苜蓿芽還有哪些植物？有哪些是厭光性種子？
2.3 有沒有哪一組的操作能夠證明光敏素(Pr、Pfr)具有可逆性？請說明

3.實作項目

1.準備4個培養皿，墊好厚紙巾，各裝入20粒苜蓿芽種子

2.將培養皿標記上組別及光處理

3.到隔壁暗室，加水到培養皿內(厚紙巾稍微濕潤)，等候10分鐘，再進行光處理

4.放回鋁箔裡，培養2天後進行萌發種子觀察

4.分析與結論

4.1 從萃取DNA膠圖中判斷是否有抽出DNA。
4.2 從PCR膠圖中判斷樣本是BAD2基因是否正常，並判斷是否與預期結果相同。
4.3 若PCR膠圖有585bp和355bp兩條bands，則代表此為純品系一般米DNA；若膠圖中有577bp和257bp兩條bands，則為純品系香米DNA；若同時具有585bp、355bp和257bp，則為異型合子的一般米。

5.教學目標與評量

5.1 了解香米具有香氣的原因是由於BAD2的缺損。
5.2 能熟悉DNA萃取的操作方式。
5.3 能從Nano drop的結果判斷DNA品質好壞。
5.4 熟悉PCR和電泳的操作方式。
5.5 能從PCR膠圖判斷樣品的種類。

6.參考資料：

7.參考說明：

萃取DNA膠圖

PCR膠圖

@@ 行 75： / 行 75： @@
 ==3.實作項目 ==
-*1.萃取DNA
+*1.準備4個培養皿，墊好厚紙巾，各裝入20粒苜蓿芽種子
-:*1.	取10粒米切取胚芽部分放入研缽。
-加BashingBead buffer 750 ul研磨。(打破細胞)
-:*2.	移入BashingBead tube。
-加Proteinase K 1 ul。(分解蛋白質)<br>
-℃ 水浴 10 min。<br>
-,000 rpm 離心 1 min。(移除雜質)
-:*3.	取上清液500 ul加入III-F filter+ collection tube。<br>
-,000 rpm 離心 1 min。(過濾雜質)
-:*4.	移除III-F filter。
-:*5.	在collection tube中，加入Lysis buffer 1500 ul。(打開DNA＋準備Binding)<br>
-和過濾液充分混合。
-:*6.	取混合液 800 ul。(DNA Binding在膜上)<br>
-加入II-C column+ collection tube。<br>
-,000 rpm 離心 1 min。
-:*7.	倒掉濾液。<br>
-重複step 6兩次。
-:*8.	把II-C column移至新的collection tube。<br>
-加入Pre-wash buffer 200 ul。(去除糖類、蛋白質)<br>
-,000 rpm 離心 1 min。
-:*9.	倒掉濾液。<br>
-加入Wash buffer 500 ul。(去除糖類、蛋白質)<br>
-,000 rpm 離心 1 min。
-:*10.	把II-C column移至新的eppendorf。
-加入Elution buffer 20 ul。(回溶DNA)<br>
-,000 rpm 離心 30 sec。
-:*11.	取HRC-filter+ collection tube。<br>
-加入Prep solution 600 ul。<br>
-,000 rpm 離心 3 min。
-:*12.	把HRC-filter移至新的eppendorf。(去除酚類)<br>
-加入剛剛Elute的DNA 20 ul。<br>
-,000 rpm 離心 3 min。
-:*13.	標上組別， -20 ℃保存。
-:*14.	測DNA濃度(NanoDrop)
+*2.將培養皿標記上組別及光處理
-:*15.	跑2%電泳
+*3.到隔壁暗室，加水到培養皿內(厚紙巾稍微濕潤)，等候10分鐘，再進行光處理
-*跑PCR
-:*1.	PCR 試劑配置-四要素<br>
-<img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/f/f1/PCR%E8%A9%A6%E5%8A%91.png/800px-PCR%E8%A9%A6%E5%8A%91.png'/>
-<br>Taq polymerase最適合的extension溫度是72℃
-*2.	PCR 試劑配置<br>
-<img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/c/ca/Pcr%E8%A9%A6%E5%8A%91%E9%85%8D%E7%BD%AE.png/800px-Pcr%E8%A9%A6%E5%8A%91%E9%85%8D%E7%BD%AE.png'/>
-*3.	PCR 條件
 <br>
-<img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/c/cd/Pcr%E6%A2%9D%E4%BB%B6.png/800px-Pcr%E6%A2%9D%E4%BB%B6.png'/>
+<img style="width:300px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/d6/Sample_seeds.png'/>
 <br>
 <img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/PCR%E6%BA%AB%E5%BA%A6.png'/>
-*4.	電泳跑膠
+*4.放回鋁箔裡，培養2天後進行萌發種子觀察
 <br>
 <img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/a/aa/%E9%9B%BB%E6%B3%B3%E8%86%A0.png/800px-%E9%9B%BB%E6%B3%B3%E8%86%A0.png'/>