不同波長影響光合作用速率

不同波長影響光合作用速率

原始設計者：彰師大

觀察植物葉片在不同光源下的的光合作用效率，了解光的波長對光合速率的影響。

實驗材料:

• 植物葉片 數片
• 打洞器(吸管) 數支
• 0.2% 小蘇打水 100 mL
• 100c.c 塑膠杯 3個/組
• 10ml 注射筒 1個/組
• 燈泡（白、藍、紅光） 1套/組

1.現象說明：

植物行光合作用以製造養分，光合作用速率因光合色素對各色光有著不同的吸收程度而有影響。

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2.探究問題：（此為引導，學習者必須要提出合理的假說）

• 2.1 觀察「萃取DNA膠圖」後標示組別與樣本種類，並寫出從膠圖中看到什麼結果？
• 2.2 標示NanoDrop測量結果，並分析你所抽取的DNA品質如何。
• 2.3 觀察「PCR膠圖」後標示組別，並寫出從膠圖中看到什麼結果？
• 2.4 查查看，池上米？越光米？台秈OO號？台農OO號？桃園OO號？壽司米？台灣米的名字種類很多，為什麼這樣命名？是依據什麼做的分類？
• 2.5 想想看，若將延長(extension)的溫度下調至36℃，會不會影響實驗結果？為什麼？

3.實作項目

• 1.萃取DNA

• 1. 取10粒米切取胚芽部分放入研缽。

加BashingBead buffer 750 ul研磨。(打破細胞)

• 2. 移入BashingBead tube。

加Proteinase K 1 ul。(分解蛋白質)
65 ℃ 水浴 10 min。
10,000 rpm 離心 1 min。(移除雜質)

• 3. 取上清液500 ul加入III-F filter+ collection tube。
  

8,000 rpm 離心 1 min。(過濾雜質)

• 4. 移除III-F filter。
• 5. 在collection tube中，加入Lysis buffer 1500 ul。(打開DNA＋準備Binding)
  

和過濾液充分混合。

• 6. 取混合液 800 ul。(DNA Binding在膜上)
  

加入II-C column+ collection tube。
10,000 rpm 離心 1 min。

• 7. 倒掉濾液。
  

重複step 6兩次。

• 8. 把II-C column移至新的collection tube。
  

加入Pre-wash buffer 200 ul。(去除糖類、蛋白質)
10,000 rpm 離心 1 min。

• 9. 倒掉濾液。
  

加入Wash buffer 500 ul。(去除糖類、蛋白質)
10,000 rpm 離心 1 min。

• 10. 把II-C column移至新的eppendorf。

加入Elution buffer 20 ul。(回溶DNA)
10,000 rpm 離心 30 sec。

• 11. 取HRC-filter+ collection tube。
  

加入Prep solution 600 ul。
8,000 rpm 離心 3 min。

• 12. 把HRC-filter移至新的eppendorf。(去除酚類)
  

加入剛剛Elute的DNA 20 ul。
15,000 rpm 離心 3 min。

• 13. 標上組別， -20 ℃保存。

• 14. 測DNA濃度(NanoDrop)

• 15. 跑2%電泳

• 跑PCR

• 1. PCR 試劑配置-四要素
  

Taq polymerase最適合的extension溫度是72℃

• 2. PCR 試劑配置
  

• 3. PCR 條件

• 4. 電泳跑膠

4.分析與結論

• 4.1 從萃取DNA膠圖中判斷是否有抽出DNA。
• 4.2 從PCR膠圖中判斷樣本是BAD2基因是否正常，並判斷是否與預期結果相同。
• 4.3 若PCR膠圖有585bp和355bp兩條bands，則代表此為純品系一般米DNA；若膠圖中有577bp和257bp兩條bands，則為純品系香米DNA；若同時具有585bp、355bp和257bp，則為異型合子的一般米。

5.教學目標與評量

• 5.1 了解香米具有香氣的原因是由於BAD2的缺損。
• 5.2 能熟悉DNA萃取的操作方式。
• 5.3 能從Nano drop的結果判斷DNA品質好壞。
• 5.4 熟悉PCR和電泳的操作方式。
• 5.5 能從PCR膠圖判斷樣品的種類。

7.參考說明：

• 萃取DNA膠圖
  

• PCR膠圖