植物防疫挑戰 如何精準檢驗植物病毒
植物防疫挑戰 ――如何精準檢驗植物病毒
原始設計者：彰師大
學習病毒檢測候選目標基因選定，以及植物病毒候選目標基因引子設計方法。
實驗材料:
- 葉片 數片
- 1.5 ml 離心管 3/個
- 廢液杯 1/個
- 離心機 1/個
- tip 1/個
- Rank 1/個
- 電子秤 1/個
- 打洞器 1/個
- 微量離心管 1/個
- Master mix(Taq, buffer, dNTP, dye) 10/µL
- TE buffer 100/ml
- Primer F’ 4/µL
- Primer R’ 4/µL
- ddH2O 1/µL
- PCR machine 1/台
- 電泳槽 1/台
1.現象說明：
1.Potato virus 馬鈴薯微嵌紋病毒
病毒顆粒為絲狀彎曲 ( Transmission electron micrographs)。PVX 感染茄科植物其病徵表現主要為系統性，感染藜科（Chenopodiaceae）或莧科（Amaranthaceae）後會造成局部性病斑（local lesions），也會感染部分豆科植物（Leguminosae）。
病徵：
- 潛伏感染，並無明顯症狀
- 輕微：斑駁
- 嚴重：
- 皺葉嵌紋
- 植株矮化
- 新生葉片小化
- 植株頂端、塊莖大量壞疽，植株死亡
2.Tobacco mosaic virus 煙草嵌紋病毒
人類第一個成功分離出的病毒
以通過濾過器，故又稱「濾過性病毒」，引起的病害稱「病毒病」、「毒素
病」，為介於生物與非生物之間的病原體。
病徵：
- 葉部呈現不規則之暗綠色與淡綠嵌紋，嵌紋邊緣多為波浪狀
- 葉片細胞壞疽
- 葉片向下捲曲
- 在菸草(Nt)過敏反應(NN vs nn)
3.Tomato leaf curl Taiwan virus 台灣番茄捲葉病毒
人類第一個成功分離出的病毒
以通過濾過器，故又稱「濾過性病毒」，引起的病害稱「病毒病」、「毒素
病」，為介於生物與非生物之間的病原體。
病徵：
- 花枯萎現象
- 植株嚴重矮化
- 片明顯朝上捲起、變形
- 從葉緣及中肋附近區域明顯黃化現象
- 罹病植株結果很少；開花期以前罹染此病毒幾乎無法結果
2.探究問題：（此為引導，學習者必須要提出合理的假說）
- 2.1 病毒如何感染植物？
- 2.2 植物病變的成因可能有哪些？
- 2.3 如何辦別植物病變的原因？
3.實作項目
- 3.1.至NCBI BLAST選取目標基因 https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi
- 3.2 下載cDNA (Download cDNA)
- 3.3 找起始密碼子ATG 終止密碼子TGA (Find ATG, TGA)
- 3.4 設計前置引子 (Design primers Forward (AT:GC 1:1 ; GC tail; 5’-3’; 20 mer))
- 3.5 設計反置引子 (Design primers Reverse (https://www.bioinformatics.org/sms/rev_comp.html))
- 3.6訂製引子 (Order primers)
- 3.7 備製100、10 及 1 uM 的引子 (Preparation of primer stock 100, 10 and 1 uM)
練習：
