"光敏素對種子發芽率影響" 修訂間的差異

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:*Pfr促進葉綠素、胡蘿蔔素、花青素合成;葉綠體的形成;子葉、葉、莖的生長
 
:*Pfr促進葉綠素、胡蘿蔔素、花青素合成;葉綠體的形成;子葉、葉、莖的生長
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==2.探究問題:(此為引導,學習者必須要提出合理的假說) ==
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==3.實作項目 ==
 
  
*1.萃取DNA
+
*2.1 光線是如何影響種子的發芽?
:*1. 取10粒米切取胚芽部分放入研缽。
+
*2.2 好光性植物種子除了苜蓿芽還有哪些植物?有哪些是厭光性種子?
加BashingBead buffer 750 ul研磨。(打破細胞)
+
*2.3 有沒有哪一組的操作能夠證明光敏素(Pr、Pfr)具有可逆性?請說明
:*2. 移入BashingBead tube。
 
加Proteinase K 1 ul。(分解蛋白質)<br>
 
65 ℃ 水浴 10 min。<br>
 
10,000 rpm 離心 1 min。(移除雜質)
 
:*3. 取上清液500 ul加入III-F filter+ collection tube。<br>
 
8,000 rpm 離心 1 min。(過濾雜質)
 
:*4. 移除III-F filter。
 
:*5. 在collection tube中,加入Lysis buffer 1500 ul。(打開DNA+準備Binding)<br>
 
和過濾液充分混合。
 
:*6. 取混合液 800 ul。(DNA Binding在膜上)<br>
 
加入II-C column+ collection tube。<br>
 
10,000 rpm 離心 1 min。
 
:*7. 倒掉濾液。<br>
 
重複step 6兩次。
 
:*8. 把II-C column移至新的collection tube。<br>
 
加入Pre-wash buffer 200 ul。(去除糖類、蛋白質)<br>
 
10,000 rpm 離心 1 min。
 
:*9. 倒掉濾液。<br>
 
加入Wash buffer 500 ul。(去除糖類、蛋白質)<br>
 
10,000 rpm 離心 1 min。
 
:*10. 把II-C column移至新的eppendorf。
 
加入Elution buffer 20 ul。(回溶DNA)<br>
 
10,000 rpm 離心 30 sec。
 
:*11. 取HRC-filter+ collection tube。<br>
 
加入Prep solution 600 ul。<br>
 
8,000 rpm 離心 3 min。
 
:*12. 把HRC-filter移至新的eppendorf。(去除酚類)<br>
 
加入剛剛Elute的DNA 20 ul。<br>
 
15,000 rpm 離心 3 min。
 
:*13. 標上組別, -20 ℃保存。
 
  
:*14. 測DNA濃度(NanoDrop)
+
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:*15. 跑2%電泳
 
  
  
*跑PCR
 
:*1. PCR 試劑配置-四要素<br>
 
<img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/f/f1/PCR%E8%A9%A6%E5%8A%91.png/800px-PCR%E8%A9%A6%E5%8A%91.png'/>
 
<br>Taq polymerase最適合的extension溫度是72℃
 
  
*2. PCR 試劑配置<br>
+
==3.實作項目 ==
<img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/c/ca/Pcr%E8%A9%A6%E5%8A%91%E9%85%8D%E7%BD%AE.png/800px-Pcr%E8%A9%A6%E5%8A%91%E9%85%8D%E7%BD%AE.png'/>
 
  
*3. PCR 條件
+
*1.準備4個培養皿,墊好厚紙巾,各裝入20粒苜蓿芽種子
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 +
<img style="width:300px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/d6/Sample_seeds.png'/>
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*2.將培養皿標記上組別及光處理
 
<br>
 
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<img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/c/cd/Pcr%E6%A2%9D%E4%BB%B6.png/800px-Pcr%E6%A2%9D%E4%BB%B6.png'/>
+
*3.到隔壁暗室,加水到培養皿內(厚紙巾稍微濕潤),等候10分鐘,再進行光處理
  
 
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<img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/PCR%E6%BA%AB%E5%BA%A6.png'/>
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<img style="width:400px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/64/Pr_Pfr_form.jpg'/>
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*4.放回鋁箔裡,培養2天後進行萌發種子觀察
  
*4. 電泳跑膠
 
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<img style="width:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/a/aa/%E9%9B%BB%E6%B3%B3%E8%86%A0.png/800px-%E9%9B%BB%E6%B3%B3%E8%86%A0.png'/>
 
  
  
行 134: 行 102:
 
==4.分析與結論 ==
 
==4.分析與結論 ==
  
*4.1 從萃取DNA膠圖中判斷是否有抽出DNA。
+
*4.1 由各組在不同光條件下種子萌芽的反應,可推得Pr、Pfr與種子萌發的關係
*4.2 從PCR膠圖中判斷樣本是BAD2基因是否正常,並判斷是否與預期結果相同。
+
*4.2 照射紅光Pfr轉換成Pr,Pr促進好光性種子萌發,則發芽率較高。
*4.3 若PCR膠圖有585bp和355bp兩條bands,則代表此為純品系一般米DNA;若膠圖中有577bp和257bp兩條bands,則為純品系香米DNA;若同時具有585bp、355bp和257bp,則為異型合子的一般米。
+
*4.3 在組別4中,照射紅光再照射遠紅光,Pfr抑制好光性種子萌發,發芽率較低,證明Pr、Pfr之間可互相轉換。
 
 
 
 
  
  
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==5.教學目標與評量 ==
 
==5.教學目標與評量 ==
  
*5.1 了解香米具有香氣的原因是由於BAD2的缺損。
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*5.1 了解光敏素的類別及影響種子萌芽的機制
*5.2 能熟悉DNA萃取的操作方式。
+
*5.2 透過不同光條件下的實驗結果,可得知光敏素與種子萌發的關係。
*5.3 能從Nano drop的結果判斷DNA品質好壞。
+
*5.3 學習準備工作與實驗的操作方式。
*5.4 熟悉PCR和電泳的操作方式。
+
 
*5.5 能從PCR膠圖判斷樣品的種類。
 
  
  
行 161: 行 126:
 
==7.參考說明: ==
 
==7.參考說明: ==
 
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*萃取DNA膠圖<br>
 
<img style="height:350px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/6a/%E8%90%83%E5%8F%96DNA%E8%86%A0%E5%9C%96.png'/>
 
*PCR膠圖
 
<img style="height:500px;" src='https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/7/72/PCR%E8%86%A0%E5%9C%96.png/800px-PCR%E8%86%A0%E5%9C%96.png'/>
 

於 2020年8月6日 (四) 19:04 的最新修訂

光敏素對種子發芽率影響

原始設計者:彰師大

探討光敏素 Pr、Pfr對好光性植物種子萌發的關係。



實驗材料:

  • 苜蓿芽種子 20粒
  • 培養盤 4個
  • 厚紙巾 4張
  • 水 適量
  • 鋁箔 8張
  • 手電筒 2個
  • 紅色透明玻璃紙 2張
  • 藍色透明玻璃紙 4張
  • 綠色透明玻璃紙 1張
  • 紅色透明玻璃紙 2張



1.現象說明:

1.光敏素(phytochrome)

 植物細胞中含量稀少的藍綠色素,成分為蛋白質,分為鈍化型(proteinred, Pr)和活化型(proteinfar-red, Pfr)兩種型態,分別吸收紅光和遠紅光而互相轉換。植物主要透過光敏素接收外界光的信號來調節本身的生長、發育和開花。過去知道在晚上,Pfr構形的光敏素會慢慢回到Pr構形;這個過程稱為黑暗回復(dark reversion)      


2.光敏素的作用

  • 2.1光週期性植物的開花誘導


  • Pfr < Pr 促進短日照;抑制長日照


  • Pfr > Pr 抑制短日照;促進長日照


  • 2.2 種子的萌發


  • Pfr 促進感光性種子萌發


  • Pr 抑制感光性種子萌發


  • 2.3 幼苗的生長


  • Pfr促進葉綠素、胡蘿蔔素、花青素合成;葉綠體的形成;子葉、葉、莖的生長






2.探究問題:(此為引導,學習者必須要提出合理的假說)

  • 2.1 光線是如何影響種子的發芽?
  • 2.2 好光性植物種子除了苜蓿芽還有哪些植物?有哪些是厭光性種子?
  • 2.3 有沒有哪一組的操作能夠證明光敏素(Pr、Pfr)具有可逆性?請說明





3.實作項目

  • 1.準備4個培養皿,墊好厚紙巾,各裝入20粒苜蓿芽種子



  • 2.將培養皿標記上組別及光處理


  • 3.到隔壁暗室,加水到培養皿內(厚紙巾稍微濕潤),等候10分鐘,再進行光處理



  • 4.放回鋁箔裡,培養2天後進行萌發種子觀察






4.分析與結論

  • 4.1 由各組在不同光條件下種子萌芽的反應,可推得Pr、Pfr與種子萌發的關係
  • 4.2 照射紅光Pfr轉換成Pr,Pr促進好光性種子萌發,則發芽率較高。
  • 4.3 在組別4中,照射紅光再照射遠紅光,Pfr抑制好光性種子萌發,發芽率較低,證明Pr、Pfr之間可互相轉換。




5.教學目標與評量

  • 5.1 了解光敏素的類別及影響種子萌芽的機制
  • 5.2 透過不同光條件下的實驗結果,可得知光敏素與種子萌發的關係。
  • 5.3 學習準備工作與實驗的操作方式。






6.參考資料:





7.參考說明: